Comunica experienta
MonitorulJuridic.ro

Trimite prin Yahoo Messenger pagina: NORMA VETERINARA din 10 iunie 2004 ce stabileste o metoda nationala de analiza pentru determinarea lasalocidului de sodiu din furaje*)

Cautare document

Termen: Tipul actului: Anul publicarii actului:

Cautare document

Termen: Tipul actului: Anul publicarii actului:

Copierea de continut din prezentul site este supusa regulilor precizate in Termeni si conditii! Click aici.
Prin utilizarea siteului sunteti de acord, in mod implicit cu Termenii si conditiile! Orice abatere de la acestea constituie incalcarea dreptului nostru de autor si va angajeaza raspunderea!

NORMA VETERINARA din 10 iunie 2004 ce stabileste o metoda nationala de analiza pentru determinarea lasalocidului de sodiu din furaje*)

EMITENT: AGENTIA VETERINARA SI PENTRU SIGURANTA ALIMENTELOR
PUBLICAT: MONITORUL OFICIAL nr. 1.020 bis din 4 noiembrie 2004

Comenteaza legea

________
*) Aprobata prin <>Ordinul nr. 24 din 10 iunie 2004 , publicat in Monitorul Oficial al Romaniei, Partea I, nr. 1020 din 4 noiembrie 2004.

ART. 1
Analizele efectuate in vederea controalelor oficiale ale continutului in lasalocid al furajelor si premixurilor trebuie sa fie realizate utilizand metoda stabilita de anexa la prezenta norma sanitara veterinara.
ART. 2
(1) Autoritatea veterinara centrala a Romaniei poate adopta, acte normative sau prevederi administrative suplimentare prezentei norme veterinare, pentru a dispune implementarea si respectarea prevederilor acesteia.
(2) Autoritatea veterinara centrala a Romaniei va lua masurile necesare si va sanctiona, potrivit legii orice incalcare a prevederilor prezentei norme veterinare.
(3) Atunci cand autoritatea veterinara centrala a Romaniei adopta cele mentionate la alineatele precedente, trebuie sa se faca o referire expresa la prezenta norma veterinara.

ANEXA
-----
la norma veterinara
-------------------

DETERMINAREA LASALOCIDULUI DE SODIU (E 763)

Sare sodica a unui polieter al acidului monocarboxilic produsa de Streptomyces lasaliensis
1. Scop si domeniu de aplicare
Metoda permite determinarea lasalocidului de sodiu din furaje si premixuri. Limita de detectie este de 5 mg/kg iar limita de determinare este de 30 mg/kg.
2. Principiul
Lasalocidul de sodiu este extras din proba cu metanol acidifiat si determinat prin cromatografie lichida de inalta performanta in faza inversa (HPLC), utilizand un detector spectrofluorimetric.
3. Reactivi
3.1. Fosfat dihidrogenat de potasiu [KH(2)PO(4)]
3.2. Acid ortofosforic, w = 85%
3.3. Solutie de acid ortofosforic, sigma = 20%
Se dilueaza 23,5 ml de acid ortofosforic (3.2) in apa si se aduce la 100 ml.
3.4. 6-metil-2-heptilamina (1,5-dimetilhexilamina), w = 99%
3.5. Metanol, de grad HPLC
3.6. Acid clorhidric, p20 1,19 g/ml
3.7. Solutie tampon de fosfat, c = 0,01 mol/l
Se dizolva 1,36 g de KH(2)PO(4) (3.1) in 500 ml de apa (3.11), se adauga 3,5 ml de acid orthofosforic (3.2) si 10,0 ml de 6-metil-2-heptilamina (3.4). Se ajusteaza pH-ul la 4,0 cu solutie de acid ortofosforic (3.3), se dilueaza cu apa si se aduce la 1000 ml (3.11).
3.8. Metanol acidifiat
Se transfera 5,0 ml de acid clorhidric (3.6) intr-un balon gradat de 1000 ml, se aduce la semn cu metanol (3.5) si se amesteca. Aceasta solutie trebuie sa fie proaspat preparata inainte de utilizare.
3.9. Faza mobila pentru HPLC, solutie tampon de fosfat si metanol 5 + 95 (V + V)
Se amesteca 5 ml de solutie tampon de fosfat (3.7) cu 95 ml de metanol (3.5).
3.10. Substanta etalon lasalocid de sodiu cu puritate garantata, C(34)H(53)O(8)Na (sare sodica de polieter a acidului monocarboxilic, produs de Streptomyces lasaliensis), E763.
3.10.1. Solutie mama din etalon de lasalocid de sodiu, 500 æg/ml
Se cantaresc cu o precizie de 0,1 mg, 50 mg de lasalocid de sodiu (3.10) intr-un balon gradat de 100 ml, se dizolva in metanol acidifiat (3.8), se aduce la semn cu acelasi solvent si se amesteca. Aceasta solutie trebuie sa fie proaspat preparata inainte de utilizare.
3.10.2. Solutie etalon intermediara de lasalocid de sodiu, 50 æg/ml
Se pipeteaza 10,0 ml de solutie mama din etalon (3.10.1) intr-un balon gradat de 100 ml, se aduce la semn cu metanol acidifiat (3.8) si se amesteca. Solutia trebuie sa fie proaspat preparata inainte de utilizare.
3.10.3. Solutii de etalonare
Se transfera 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 si 10,0 ml din solutia etalon intermediara (3.10.2) intr-o serie de baloane gradate de 50 ml. Se aduce la semn cu metanol acidifiat (3.8) si se amesteca. Aceste solutii corespund respectiv la 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 si 10,0 æg de lasalocid de sodiu pe ml. Aceste solutii trebuie sa fie proaspat preparate inainte de utilizare.
3.11. Apa, de calitate HPLC
4. Aparatura
4.1. Baie cu ultrasunete (sau baie de apa cu agitator) cu reglaj de temperatura
4.2. Filtre cu membrana de 0,45 æm
4.3. Echipament HPLC cu sistem de injectie, corespunzator pentru injectarea de volume de 20 de æl
4.3.1. Coloana pentru cromatografie lichida de 125 mm x 4 mm, in faza inversa C18, umplere de 5 æm sau echivalenta
4.3.2. Spectrofluorimetru cu ajustarea lungimilor de unda variabile a lungimilor de unda de excitatie si emisie
5. Procedura
5.1. Generalitati
5.1.1. Furaj martor
Pentru efectuarea testului de recuperare (5.1.2), trebuie analizat un furaj martor pentru a se verifica faptul ca nu este prezent lasalocid de sodiu sau substante interferente. Furajul martor trebuie sa fie de tip similar cu cel al probei si nu trebuie sa fie detectate lasalocidul de sodiu sau substantele intereferente.
5.1.2. Test de recuperare
Trebuie efectuat un test de recuperare prin analizarea furajului martor ce a fost imbogatit prin adaugarea unei cantitati de lasalocid de sodiu, similara celei prezente in proba. Pentru a se fortifica la un nivel de 100 mg/kg, se transfera 10,0 ml din solutia mama din etalon (3.10.1) intr-un balon conic de 250 ml si se evapora solutia pana la aproximativ 0,5 ml. Se adauga 50 g de furaj martor, se amesteca cu grija si se lasa timp de 10 minute, amestecand din nou de mai multe ori inainte de a se continua cu faza de extractie (5.2).
Alternativ, daca un furaj martor de tip similar cu cel al probei nu este disponibil (vezi 5.1.1), poate fi efectuat un test de recuperare prin intermediul metodei de adaugare de etalon. In acest caz, proba ce trebuie analizata este imbogatita cu o cantitate de lasalocid de sodiu, similara celei deja prezente in proba. Aceasta proba este analizata impreuna cu proba neimbogatita iar recuperarea calculata prin diferenta.
5.2. Extractia
5.2.1. Furaje
Se cantaresc cu precizie de 0,01 g, intre 5 g si 10 g de proba intr-un balon conic de 250 ml cu dop. Se adauga prin pipetare 100,0 ml de metanol acidifiat (3.8). Se astupa lejer si se agita pentru a se dispersa. Se plaseaza balonul intr-o baie cu ultrasunete (4.1) la aproximativ 40°C timp de 20 de minute, apoi se scoate si se raceste la temperatura camerei. Se lasa sa stea aproximativ 1 ora pana ce s-au decantat materiile in suspensie, apoi se filtreaza o parte alicota printr-un filtru cu membrana de 0,45 æm (4.2) intr-un vas corespunzator. Se continua cu determinarea HPLC (5.3).
5.2.2. Premixuri
Se cantaresc cu precizie de 0,001 g aproximativ 2 g de premix nemaruntit intr-un balon gradat de 250 ml. Se adauga 100,0 ml de metanol acidifiat (3.8) si se agita pentru a se dispersa. Se plaseaza balonul si continutul intr-o baie cu ultrasunete (4.1), la aproximativ 40°C, timp de 20 de minute, apoi se scoate si se raceste la temperatura camerei. Se dilueaza pana la semn cu metanol acidifiat (3.8) si se amesteca cu grija. Se lasa sa stea timp de o ora pana se decanteaza materiile in suspensie, apoi se filtreaza o parte alicota printr-un filtru cu membrana de 0,45 æm (4.2). Se dilueaza un volum corespunzator de filtrat clar cu metanol acidifiat (3.8), pentru a se obtine o solutie de testare finala ce contine aproximativ 4 æg/ml de lasalocid de sodiu. Se continua cu determinarea HPLC (5.3).
5.3. Determinarea HPLC
5.3.1. Parametri
Urmatoarele conditii sunt oferite spre orientare; pot fi utilizate alte conditii cu conditia ca acestea sa dea rezultate echivalente:
Coloana cromatografica lichida (4.3.1): 125 mm x 4 mm, in faza inversa C18, umplere de 5 æm sau echivalenta
Faza mobila (3.9): Amestec de solutie tampon de fosfat (3.7) si metanol (3.5), 5 + 95 (V + V)

Debit: 1,2 ml/min
Lungimea undei de detectie:
- Excitatie: 310 nm
- Emisie: 419 nm
Volum de injectie: 20 æl

Se verifica stabilitatea sistemului cromatografic, injectandu-se de mai multe ori solutia de etalonare (3.10.3) ce contine 4,0 æg/ml, pana cand sunt obtinute inaltimi (sau arii) ale picului si timpi de retentie constanti.
5.3.2. Curba de etalonare
Se injecteaza fiecare solutie de etalonare (3.10.3) de mai multe ori si se determina inaltimile (ariile) medii ale picului, pentru fiecare concentratie. Se stabileste o curba de etalonare utilizand inaltimile (ariile) medii ale picului ca ordonate si concentratiile corespondente in æg/ml ca abscise.
5.3.3. Solutia probei
Se injecteaza extractul probei (5.2.1 sau 5.2.2) de mai multe ori, utilizand acelasi volum ca cel retinut pentru solutia de etalonare si se determina inaltimile (ariile) medii ale picului lasalocidului de sodiu.
6. Calcularea rezultatelor
Plecand de la inaltimea (aria) medie a picului produsa prin injectarea solutiei probei (5.3.3), se determina concentratia de lasalocid de sodiu (æg/ml) prin raportare la curba de etalonare.
6.1. Furaje
Continutul in lasalocid de sodiu, w (mg/kg) din proba este dat de urmatoarea formula:


       beta ● V(1)

unde:
beta = continutul in lasalocid de sodiu al solutiei probei (5.2.1) in æg/ml;
V(1) = volumul extractului probei, in conformitate cu 5.2.1 in ml (de ex. 100);
m = masa partii de test, in g.
6.2. Premixuri
Continutul in lasalocid de sodiu, w (mg/kg) din proba este dat de urmatoarea formula:


         beta ● V(2) ● f

unde:
beta = concentratia de lasalocid de sodiu a solutiei probei (5.2.2) in æ/ml;
V(2) = volumul extractului probei, in conformitate cu 5.2.2 in ml (de ex. 250);
f = factor de dilutie, in conformitate cu 5.2.2;
m = masa partii de test in g.
7. Validarea rezultatelor
7.1. Identitate
Metodele bazate pe spectrofluorimetrie sunt mai putin supuse interferentei decat cele la care este utilizata detectia UV. Identitatea substantei de analizat poate fi confirmata prin co-cromatografie.
7.1.1. Co-cromatografie
Un extract al probei (5.2.1 sau 5.2.2) este imbogatit prin adaugarea unei cantitati corespunzatoare din solutia de etalonare (3.10.3). Cantitatea de lasalocid de sodiu adaugata trebuie sa fie similara cu cantitatea de lasalocid de sodiu constatata in extractul probei. Numai inaltimea picului lasalocidului de sodiu trebuie sa fie mai mare intr-o masura ce este corelata cu cantitatea de lasalocid de sodiu adaugata si dilutia extractului. Largimea picului la jumatatea inaltimii trebuie sa se situeze la ±10% de largimea initiala a picului produsa de extractul probei neimbogatite.
7.2. Repetabilitate
Diferenta dintre rezultatele a doua determinari paralele efectuate pe aceeasi proba nu trebuie sa depaseasca:
- 15% cu referire la valoarea maxima pentru continutul in lasalocid de sodiu de la 30 mg/kg la 100 mg/kg,
- 15 mg/kg pentru continutul in lasalocid de sodiu de la 100 mg/kg la 200 mg/kg,
- 7,5% cu referire la valoarea maxima pentru un continut in lasalocid de sodiu mai mare de 200 mg/kg.
7.3. Recuperare
Pentru proba de furaj (martor) imbogatita, recuperarea trebuie sa fie de cel putin 80%. Pentru probele de premix imbogatite, recuperarea trebuie sa fie de cel putin 90%.
8. Rezultatele unui studiu de colaborare
A fost organizat un studiu de colaborare in care 2 probe de premixuri (probele 1 si 2) si 5 probe de furaje (probele 3-7) au fost analizate de 12 laboratoare. Pentru fiecare proba au fost efectuate analize duble. Rezultatele sunt date in urmatorul tabel:


┌──────────────────────┬───────┬───────┬───────┬───────┬───────┬───────┬───────┐
│                      │Proba 1│Proba 2│Proba 3│Proba 4│Proba 5│Proba 6│Proba 7│
│                      │Premix │Premix │Pelete │Granule│ Furaj │Furaj A│Furaj B│
│                      │  pui  │ curci │ curci │  pui  │ curci │pasari │pasari │
├──────────────────────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┤
│L                     │  12   │  12   │  12   │  12   │  12   │  12   │  12   │
│N                     │  23   │  23   │  23   │  23   │  23   │  23   │  23   │
│Medie (mg/kg)         │ 5.050 │16.200 │ 76,5  │ 78,4  │ 92,9  │ 48,3  │ 32,6  │
│S(r) (mg/kg)          │  107  │  408  │ 1,71  │ 2,23  │ 2,27  │ 1,93  │ 1,75  │
│CV(r) (%)             │ 2,12  │ 2,52  │ 2,24  │ 2,84  │ 2,44  │ 4,00  │ 5,37  │
│S(R) (mg/kg)          │  286  │  883  │ 3,85  │ 7,32  │ 5,29  │ 3,47  │ 3,49  │
│CV(R) (%)             │ 5,66  │ 5,45  │ 5,03  │ 9,34  │ 5,69  │ 7,18  │ 10,70 │
│Continut nominal      │5000*) │16000*)│ 80*)  │ 105*) │ 120*) │ 50+)  │ 35+)  │
│(mg/kg)               │       │       │       │       │       │       │       │
└──────────────────────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┘

    L: numar laboratoare
    n: numar rezultate unice
    Sr: deviatie standard a repetabilitatii
    SR: deviatie standard a reproductibilitatii
    CVr: coeficient de variatie a repetabilitatii, %
    CVR: coeficient de variatie a reproductibilitatii, %

*) continut declarat de fabricant.
+) furaj preparat in laborator.

-------------

Newsletter GRATUIT

Aboneaza-te si primesti zilnic Monitorul Oficial pe email

Tags: Monitorul Oficial, Acte Monitorul Oficial, Norme Metodologice, Alte Institutii, NORMA VETERINARA din 10 iunie 2004

Comentarii

Fii primul care comenteaza.

MonitorulJuridic.ro este un proiect:

Atentie, Juristi!

5 modele Contracte Civile si Acte Comerciale - conforme cu Noul Cod civil si GDPR

Legea GDPR a modificat Contractele, Cererile sau Notificarile obligatorii

Va oferim Modele de Documente conform GDPR + Clauze speciale

Descarcati GRATUIT Raportul Special "5 modele Contracte Civile si Acte Comerciale - conforme cu Noul Cod civil si GDPR"